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酶標儀國產(chǎn)和進口怎么選擇？酶標儀怎么選購？
2020-10-28
酶標儀國產(chǎn)和進口怎么選擇
建議采購進口產(chǎn)品。國產(chǎn)產(chǎn)品不能測讀384孔板進口產(chǎn)品精確度好，穩(wěn)定性高，可測讀384孔板。
酶標儀方法與原理
1.1濾光片波長精度檢查及其峰值測定
1.1.1方法及其衡量的標準：用高精度紫外可見分光光度計（波長精度±0.3nm）對不同波長的濾光片進行光譜掃描，檢測值與標定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好，波長精度越高。
1.1.2理論基礎(chǔ)：酶標儀的濾光片質(zhì)量好壞，直接影響儀器的靈敏度高低，而濾光片的質(zhì)量又是以其波長精度及其峰值指標來衡量的，因此濾光片波長精度及峰值是衡量酶標儀的重要參數(shù)之一，這在廠家的儀器說明書中雖未曾提及，但在儀器的實際使用過程中，我們發(fā)現(xiàn)對濾光片波長精度和峰值進行檢查是重要的也是必要的，通過檢查可以發(fā)現(xiàn)濾光片的波長標定值與實測值的符合程度，可以發(fā)現(xiàn)濾光片的質(zhì)量是否符合要求。
1.2靈敏度和準確度的監(jiān)測
1.2.1方法：①靈敏度：精確配制6ug/ml重鉻酸鉀（干燥）溶液（0.05mo1／L硫酸溶解），加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mo1／L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長650nm）測定，其吸光度應(yīng)≥0.01A。②準確度：準確配制：1mmo/L對硝基苯酚（提純品）水溶液，然后以10mmo1／L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmo1／LNaOH溶液作空白，于405nm（參比波長650nm）檢測，其吸光度應(yīng)在0.4A（0.395～0.408A）左右。
1.2.2說明：儀器的靈敏度和準確度主要受兩個因素影響：一是濾光片波長的精度，二是檢測器的質(zhì)量。通常情況下，濾光片原因?qū)е聝x器的靈敏度和準確度下降比較容易檢查；而檢測器質(zhì)量差異則不易被發(fā)現(xiàn)，因此我們采用上述兩種標準物質(zhì)溶液對儀器檢測器的質(zhì)量進行定期監(jiān)測，從而保證了儀器檢測結(jié)果的可靠性。對于儀器準確性的測定，我們采用了文獻報道的方法，經(jīng)過多次在不同型號儀器間進行反復(fù)測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該標準物溶液在450nm波長處有一較為恒定的測定值，由于酶標儀與其它分光光度計的光學(xué)原理不完全相同，故是否可以作為評價酶標儀準確性的參考方法還有待同行進一步研究考證。
1.3通道差與孔間差檢測
1.3.1方法及其表達方式：①通道差檢測：取一只酶標板小孔杯（杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染）以酶標板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200ul先后置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長（測定波長490nm，參比波長630或650nm，以下均相同）連續(xù)測三次，觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性可用極差值來表示其通道差。②孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070A）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。
1.3.2理論解釋：為了提高酶標儀的檢測速度，根據(jù)96孔酶標板的規(guī)格特點，目前大多數(shù)廠家的中、高檔酶標儀均采用8通道的檢測器（部分中、低檔酶標儀目前仍采用單通道）．因而它們每個通道的檢測能力是不盡相同的，它是儀器內(nèi)部的固有誤差，與所測溶液濃度成正相關(guān)（不同檢測器對不同濃度溶液的響應(yīng)能力不同），所以通道差是衡量酶標儀性能良好與否的重要指標之一；其衡量指標用極差表示，這與廠家推薦的指標是一致的；極差值越接近于零，通道差越小，說明同一樣品于不同通道檢測結(jié)果的一致性越好。
由于不同廠家、不同批號酶標板之間的質(zhì)量差異，導(dǎo)致孔與孔之間的檢測結(jié)果也不完全一致，這與水平光路光度計的比色皿質(zhì)量是否符合要求一樣，因此我們認為孔間差是儀器外部的固有誤差，只有準確測知孔間差，并對結(jié)果作出相應(yīng)的校正，才能使檢驗結(jié)果更符合實際情況、更準確可靠；采用的評價指標（士1.96s）也是有利于結(jié)果校正的。另外，在設(shè)計孔間差測量的操作方法上，我們將200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.065～0.070A，是充分考慮到加樣器的誤差（上海求精公司，200ul，士2％CV），其目的是使加樣誤差控制在儀器的分辨率（0.01A）以下，這樣也就避免了孔間差結(jié)果不因加樣誤差而導(dǎo)致假性增高。
1.4零點飄移
1.4.1方法：取八只小孔杯，分別置于八個通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長或單波長（490nm）每隔30min測定一次，觀察8個通道4h內(nèi)的吸光度變化。其與零點的差值即為零點飄移。
1.4.2測量原理：酶標儀的零點飄移通常是很小的，這是由于儀器在讀數(shù)之前，先要做8個通道的本底測量（Io）．然后再讀取樣品板的各孔測定值（I），根據(jù)Beer'slaw光吸收值=1ogl0（Io／I），每次讀數(shù)經(jīng)過如此的自動校正，使得讀數(shù)誤差大大降低，這樣的測讀方式無疑是非常正確的的；另外有的儀器是應(yīng)用"DRLDYE"檢測試條來進行絕對吸光度的校準的，因此在采用單波長測量時，會導(dǎo)致吸光度的假性增高，這種儀器可采取兩種方法進行校正，一是選擇一合適的參比濾光片進行雙波長測定，二是引入修正參數(shù)，即在吸光度模式下單波長讀取1個空白孔，其測試值和預(yù)測值之差值即為修正參數(shù)。所以零點飄移是評價儀器在一定時間內(nèi)零點吸光度的變化趨勢，與波長無關(guān)，它間接地反映了儀器內(nèi)部檢測系統(tǒng)在單位時間內(nèi)處于工作狀態(tài)下的穩(wěn)定性及儀器的機械性能情況（連續(xù)進板、檢測、退出），故它是評估儀器內(nèi)部電路系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)（檢測器）及機械系統(tǒng)良好與否的指標。
1.5精密度評價
1.5.1方法及評價指標：每個通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長作雙份平行測定，每日測定兩次，連續(xù)測定20天。分別計算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。
1.5.2理論依據(jù)：1984年美國臨床實驗室標準委員會發(fā)表了EP5一T文件并于1992年進行了第二次修訂：臨床化學(xué)儀器精密度性能的用戶評價。該評價方案在生化分析儀、血細胞計數(shù)儀等儀器和試劑的評價中得到了廣泛的應(yīng)用，使評價儀器的方法得到了統(tǒng)一；而該法應(yīng)用于酶標儀的評價在國內(nèi)外則尚未見有類似的報道，我們采用該法對酶標儀進行系統(tǒng)評價，結(jié)果是比較滿意的。各指標的意義為：批內(nèi)精密度系由20d中每天兩批，每批兩次之差（即"批內(nèi)"）經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后所得的結(jié)果；日內(nèi)批間精密度系由20d中每天兩批測定結(jié)果均值之差（即"批間"）經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后所得的結(jié)果；日間精密度表示20d中每天所測均值的標準差即標準誤，反映了每日均值的離散度；總精密度則是對批內(nèi)、批間和日間精密度進行加權(quán)統(tǒng)計的結(jié)果。其中以批內(nèi)精密度和總精密度的應(yīng)用最為廣泛，與傳統(tǒng)的批內(nèi)精密度的計算方法（即對同一標本在同一天內(nèi)同時重復(fù)測定多次）相比，前者更符合實驗室的實際情況，更有代表性，也更加合理；而總精密度則客觀地全面地反映了實驗室的總體變異情況。
1.6線性測定
1.6.1方法：精確稱取甲基橙配制5個系列濃度的溶液，采用雙波長平行檢測8次求其均值。計算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標準估計誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95％測量范圍。
1.6.2評價指標解釋：線性測定也是評價儀器的重要手段之一，因為它是儀器開展定量工作的基礎(chǔ)和前提，某些廠家用標準估計誤差s來衡量線性，這與實驗室通常所采用的相關(guān)系數(shù)r是一致的，因此在進行線性評估時，我們同時報告r和Sy,x，目的是為了增強用戶與廠家之間的可比性。
1.7雙波長評價
1.7.1方法：在運用酶標儀檢測樣品時，由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等，這些都是儀器測定過程中最常見的干擾因素，而標本中的干擾組份（如溶血、黃道）因洗滌而對測定結(jié)果影響則較小，因此我們將文獻中的雙被長評價方法改為：取同一廠、同一批號酶標板條（每個通道2條共24孔）每孔加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070A）先后于8個通道分別采用單波長（490nm）和雙波長（測定波長490nm、參比波長630／650nm）進行檢測，計算單波長和雙波長測定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統(tǒng)計學(xué)差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。
1.7.2說明：雙波長測定過程中，由于標本中干擾組份的存在以及小孔杯本身質(zhì)量等原因，常常導(dǎo)致測定結(jié)果的假性增高，而酶標儀提供的雙波長測定功能則可以消除干擾組份或因素對測定結(jié)果的影響．對于標本中干擾組份的清除，在選擇參比波長時，我們應(yīng)對于擾組份的光譜進行研究，以正確選擇參比波長；而對于小孔杯本身質(zhì)量問題等干擾因素的消除，只要選擇遠離測定波長的參比波長即可以了、這對保證測定結(jié)果的準確性是非常重要的。
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